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Cat. Number
HA11614
Chemical Name
转染级 线性聚乙烯亚胺 线性PEI MW 40000
CAS Number
49553-93-7
Mol. Weight
40,000
Qty 1
1g
Qty 2
5g
Appearance
白色至灰白色自由流动的固体
Solubility
溶于水, 不溶于常用有机溶剂
Storage condition
室温,避光干燥储存。
References

PEI MAX 40K(在游离碱中也称为PEI 22K)是一种功能强大,值得信赖且经济实惠的瞬时转染试剂。在HEK293和CHO大多数表达系统中,PEI MAX都能提供稳定的高表达(96孔板至100L生物反应器)。现在每年有更多的研究人员和公司选择使用PEI MAX进行细胞转染,因为相对于大多数转染试剂而言 PEI MAX既能得到稳定的高表达又能使转染成本降低最少40%。上海惠诚生物现货提供转染级 线性聚乙烯亚胺 线性PEI MW 40000。

PEI MAX 比更PEI 25K易于使用,并且比PEI 25K有更高的转染效率,通常PEI 25K转染过程通常需要几个小时才能完成准备,而PEI MAX 40K可在两小时内完成整个转染过程。另外,PEI 25K含有4-11%的残留丙酰基,这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合,而PEI MAX 40K的丙酰基完全脱落,意味着PEI MAX每批产品的性能更加稳定。

聚乙烯亚胺,线性聚乙烯亚胺,线性PEI配置方法:

1:称取100mg PEI MAX,加新鲜的细胞级别的水90ml,搅拌溶解。

2:调整pH值至7.0 ,定容至100ml,用0.22um的滤器过滤,分装后储存于4℃,保质期可以达到12个月。

转染操作流程:

一、稳转方法

1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /15 mL 离心管。

3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 1.5 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 5h 即可检测到转入基因的表达。

5.转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍 以上),在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

二、瞬时转染方法

1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 1.5 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 5 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定最适合检测时间。


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